什么叫限制性内切酶

1.第一类限制性内切酶能识别专一的核苷酸顺序,并在识别点附近的一些核苷酸上切割DNA分子中的双链,但是切割的核苷酸顺序没有专一性,是随机的: 2.第二类限制性内切酶能识别专一的核苷酸顺序,并在该顺序内的固定位置上切割双链,这类限制性内切酶的识别和切割的核苷酸都是专一的,这种酶的切割可以有两种方式,一是交错切割,形成两条单链末端,这种末端的核苷酸顺序是互补的,可形成氢键,称为粘性末端,另一种是在同一位置上切割双链,产生平头末端: 3.第三类限制性内切酶也有专一的识别顺序,但不是对称的回文顺序,它在

只能识别一种核苷酸序列.因为一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并在特定位点进行切割,这是酶专一性的典型表现.限制酶是识别特定的核苷酸序列,并在每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶.根据酶的功能特性.大小及反应时所需的辅助因子,限制性内切酶可分为两大类.

脱氧核糖核酸酶即是DNA酶,灰色至类白色粉末.用于从蛋白样品中去除DNA,但无法水解紧密的核染色质. DNA酶是水解DNA的一类核酸酶,包括内切酶(DNaseI和限制性内切酶)与外切酶(外切酶Ⅲ.Ⅶ).DNA酶广泛存在于多种哺乳动物.虾类.昆虫和植物中,对于个体的发育.细胞正常的老化凋亡.以及防御系统的构建具有重要的生物学功能. DNA酶是一种多功能核酸内切酶,可以以非特异性的方式切割DNA,作用于两个脱氧核糖核苷酸之间的3,5-磷酸二酯键,将DNA链切割开并将其降解成单个核苷酸或寡聚核苷酸.

体外克隆目的基因方法有很多,目前用于获得目的基因的方法有几种,如:限制性内切酶.直接分离法.文库筛选法.体外扩增法和人工合成法等,其中限制性内切酶法直接分离目的基因和多聚酶链式反应(PCR),或逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)体外扩增目的DNA片段是目前最常用的方法.将基因组DNA用限制性内切酶消化后插入到适当载体中,得到含有不同插入片段的克隆载体,这种克隆载体的混合物含有长短不同的基因组片段,这就是基因文库.

DNA甲基化作用是修饰DNA序列.DNA甲基化可引起基因组中相应区域染色质结构变化,使DNA失去核酶ö限制性内切酶的切割位点,以及DNA酶的敏感位点,使染色质高度螺旋化,凝缩成团,失去转录活性. DNA甲基化是指在DNA甲基化转移酶的作用下,在基因组CpG二核苷酸的胞嘧啶5碳位共价键结合一个甲基基团.DNA甲基化在基因表达调控.基因印记的维持.X染色体失活状态的维持.以及抑制转座子重复序列的转座等方面都有非常重要的作用.

Marker是一个英文单词,具有多种含义,一是指表面覆盖有特殊反光材料的标记物,常见形状有球形.半球形.二是生物学中指标记(Marker)等. 标记(Marker),染色体上一个可以被识别的区域(比如限制性内切酶的酶切点,基因的位置等).标记的遗传能够被检测出来.标记可以是染色体上有表达功能的部分(比如基因),也可以是没有编码蛋白质功能但遗传特性能够被检测出来的部分.

dna起反应了常常受到DNA末端结构等的影响. dna起反应,是指利用DNA连接酶把载体DNA和要克隆的目的DNA片段连接在一起,成为一个完整的重组分子,这就是分子克隆中常说的连接反应.当载体DNA和外源DNA末端都是由一种产生粘性末端的内切酶切割产生的话(同尾酶也可以),或者两者末端被接上一段互补的多聚体的尾巴,那么经退火后可形成新的重组分子.连接后产生的重组分子中仍然保留着外源DNA两端的限制性内切酶切点,从而使我们能方便地从重组分子再次取出所克隆的DNA段.

1.所需要的酶是:切割质粒的限制性内切酶.将二者连接完整的连接酶. 2.通过基因工程手段,用特定的限制性内切酶,切割目的基因和质粒载体. 3.用DNA连接酶连接,用氯化钙或者电刺激处理原核生物细胞,把带有目的基因的载体导入原核生物.

回文结构指双链DNA中含有的结构相同.方向相反的序列. 双链DNA中含有的两个结构相同.方向相反的序列称为回文结构,每条单链以任一方向阅读时都与另一条链以相同方向阅读时的序列是一致的. 回文结构序列是一种旋转对称结构,在轴的两侧序列相同而反向.当然这两个反向重复序列不一定是连续的. 短的回文结构可能是一种特别的信号,如二型限制性内切酶的识别位点.较长的回文结构容易转化成发夹结构.