PCR与测序反应的异同点

利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物.直到掺入一种链终止核苷酸为止.被检测的DNA碱基顺序依次读出800bp以上,sanger测序是一代所有测序和新一代所有测序的金标准.<br>sanger测序即目前所有基因检测的国际金标准,是包括荧光定量PCRTaqman探针法.普通PCR法.芯片法.二代测序法.质谱法等方法的金标准.

分子标记种类有很多: 第一代分子标记以RFLP为代表,是基于酶切位点的多态性开发的分子标记:第二代分子标记以SSR为代表,是基于简单重复序列的多态性:第二代分子标记通过引物的特殊设计,能够扩增DNA上的相应位置的序列,根据多态性,进行下一步分析:第三代分子标记以SNP为代表,单核苷酸多态性:是基于高通量测序为基础的新一代分子标记技术.分子标记是生物遗传标记的一种.通过引物设计的不同,用PCR的方法在生物的基因组DNA上扩增出相关条带,通过电泳.软件识别.分析,可用作生物遗传信息的研究.

PCR的用途有: 1.核酸的基础研究,基因组克隆: 2.不对称PCR制备单链DNA用于DNA测序: 3.反向PCR测定未知DNA区域: 4.反转录PCR用于检测细胞中基因表达水平.RNA病毒量以及直接克隆特定基因的cDNA: 5.荧光定量PCR用于对PCR产物实时监控: 6.cDNA末端快速扩增技术: 7.检测基因的表达.

免疫组库测序,韩健,韩健做的免疫组库,最近免疫组库测序很火,文章产出也很大,各大生物测序公司也都想在免疫组库上发力,想成为未来的一个发展支撑点.但离临床还有一定距离,现在能应用临床的极少,在 T,B淋巴细胞白血病预后监控有点实际应用,因为最近一年都在做相关工作,发现中间存在大量问题,这里不细说了,韩健博士是一个很成功的创业家,生物科学家,听过几次他在国内的演讲,中西智慧结合的一个人,韩博士的免疫组库主要点是他的一个好的PCR技术,他是做PCR出身的,二代测序平台就不说了,也不是他管的了的,一套多

pcr医学上并没有具体的确定值范围,pcr只是一种在体外扩增DNA分子的一种分子生物学技术. 生物学是研究生物(包括植物.动物和微生物)的结构.功能.发生和发展规律的科学.自然科学的一个部分.目的在于阐明和控制生命活动,改造自然,为农业.工业和医学等实践服务.几千年来,我国在农.林.牧.副.渔和医药等实践中,积累了有关植物.动物.微生物和人体的丰富知识.1859年,英国博物学家达尔文<物种起源>的发表,确立了唯物主义生物进化观点,推动了生物学的迅速发展.

有的医院正常值定103copy/ml以下,有的定在104copy/ml以下,有的定在105copy/ml以下,各个医院检测数值没有可比性. 使用的检测方法主要有:荧光定量PCR技术,竞争PCR技术,PCR酶联免疫吸附法,荧光标记物法和PCR酶联化学发光法.这些方法各有优缺点,使用的试剂来源于不同国家和地区,仪器设备也是五花八门,设立的标准曲线以及标准荧光等各不相同,得出的正常值各不相同.

Sanger法测序的原理就是利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物.直到掺入一种链终止核苷酸为止.每一次序列测定由一套四个单独的反应构成,每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP),并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP).由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基因,使延长的寡聚核苷酸选择性地在G.A.T或C处终止.终止点由反应中相应的双脱氧而定.每一种dNTPs和ddNTPs的相对浓度可以调整,使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物.它们具有共同的起始点,但

脱氧核糖核酸测序即DNA测序(DNAsequencing)是指分析特定DNA片段的碱基序列,也就是腺嘌呤(A).胸腺嘧啶(T).胞嘧啶(C)与鸟嘌呤的(G)排列方式.快速的DNA测序方法的出现极大地推动了生物学和医学的研究和发现. 测序原理: 1.化学修饰法测序原理 化学试剂处理末段DNA片段,造成碱基的特异性切割,产生一组具有各种不同长度的DNA链的反应混合物,经凝胶电泳分离. 2.Sanger法测序的原理 就是利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物.直到掺入一种链终止核苷酸为止

实时荧光定量PCR(QuantitativeReal-timePCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法.通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法. Real-timePCR是在PCR扩增过程中,通过荧光信号,对PCR进程进行实时检测.由于在PCR扩增的指数时期,模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,所以成为定量的依据.