目的基因的表达

先用realtime检测mRNA水平是否表达,如果本身就存在这个基因,就看"是否表达"提高了很多,然后再做westernblot检测蛋白水平是否表达,如果这个基因可以影响细胞的某些功能的话,再检测细胞的一些指标看是否有预期的变化. 基因(遗传因子)是具有遗传效应的DNA片段(部分病毒如烟草花叶病毒.HIV的遗传物质是RNA).基因支持着生命的基本构造和性能.储存着生命的种族.血型.孕育.生长.凋亡等过程的全部信息.

1.外源基因的拷贝数 : 2.外源基因的表达效率:启动子的强弱,核糖体接合位点的有效性,SD序列和起始密码ATG的间距,密码子组成: 3.表达产物的稳定性: 4.细胞代谢负荷: 5.工程菌的培养条件.

目的基因的检测是检测标记基因,而其鉴定是观测目的基因所表达出来的性状. 所谓检测,就是看目的基因是否已经成功导入受体细胞,要看的是标记基因.导入细胞后,基因并不一定会遗传给后代并表达出来,所以要再鉴定目的基因的性状.一定是先检测,后鉴定.因为受体细胞表达的不一定是整合到细胞核内的,即不一定是能传给下一代,所以要先检测筛选掉没有标记基因的,再检测选出能够表达的.

1.从基因文库中获取目的基因:2.cDNA文库:3.反转录法:4.人工合成法.目的基因,也称靶标基因,是指在实验中研究或操纵的特定基因.在基因克隆过程中目的基因就是要分离.纯化.克隆并转化到生物体的那个可以带来预期表型性状如抗虫或耐除草剂的基因. 目的基因获得方法是取得含有所需生物学功能或编码所需产物结构基因的DNA片段的方法.1969年贝克威思等从大肠杆菌中分离出了乳糖操纵子DNA,以后有不少科学家用生物学方法.物理化学方法分离出许多纯化的基因.但总的来看为数不多. 1970年首次完成了77对

获取目的基因的两大途径是:人工合成和从细胞中分离,人工合成法包括反转录法(先获得信使RNA,通过逆转录合成DNA)和化学合成法(先分析出蛋白质的氨基酸顺序,再依次推算出信使RNA.DNA的碱基顺序,用脱氧核苷酸人工合成). 目的基因,就是指已被或欲被分离.改造.扩增和表达的特定基因或DNA片段,一般能编码某一产物或控制某一性状.

1.当目的基因的序列已知时:用化学方法合成目的基因,或用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因. 将含有某种生物的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存.各个受体菌分别含有这种生物不同的基因,称为基因文库.当需要某一片段时,根据目的基因的有关信息来获取目的基因.如根据基因的核苷酸序列.基因的功能.基因在染色体上的位置.基因的转录产物mRNA,以及基因的表达产物蛋白质等特性来获取目的基因. 2.当目的基因序列未知时:建立一个包括目的基因在内的基因文库,从基因文库中提取目的基因. 3.用PCR技术扩增

将目的基因导入植物细胞的方法包括:农杆菌转化法.基因枪法.花粉管通道法.其中,农杆菌转化法是用的最多的方法,主要是针对双子叶植物和裸子植物. 基因工程的原料就是目的基因.所谓目的基因,就是指已被或欲被分离.改造.扩增和表达的特定基因或DNA片段,一般能编码某一产物或控制某一性状.

1.从基因文库中获取目的基因:将含有某种生物的许多基因片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物不同的基因,称为基因文库. 当需要某一片段时,根据目的基因的有关信息,如根据基因的核苷酸序列.基因的功能.基因在染色体上的位置.基因的转录产物,以及基因的表达产物蛋白质等特性来获取目的基因: 2.化学合成法:已知目的基因的核苷酸序列,可用合成仪直接合成: 3.聚酶链式反应:已知目的基因引物的序列,将整个基因放入合成仪,因为只有当引物与模板结合后基因热聚合酶才能行使聚合功能,所以只有引物中

检测是否成功导入目的基因的方法是在目的基因片段中偶联一个抗生素的抗性基因片段源,将他们作为一个整体导入受体,用抗生素在受体上做一个杀伤曲线度,根据这个曲线选择合适的抗生素浓度,在培养受体时加压筛选,能够留下来的受体都是已经成功导入目的基因. 目的基因也称靶标基因,是指在实验中研究或操纵的特定基因.在基因克隆过程中目的基因就是要分离.纯化.克隆并转化到生物体的那个可以带来预期表型性状如抗虫或耐除草剂的基因.