关于基因表达载体的构建

1.在构建基因表达载体时要用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶. 2.基因表达载体的构建(即目的基因与运载体结合)是实施基因工程的第二步,也是基因工程的核心. 3.其构建目的是使目的基因能在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时,使目的基因能够表达和发挥作用.

基因表达载体的构建,即目的基因与运载体结合,是实施基因工程的第二步,也是基因工程的核心: 其构建目的是使目的基因能在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时,使目的基因能够表达和发挥作用.

基因表达载体的组成部分有:启动子.终止子.标记基因.目的基因,基因表达载体的构建(即目的基因与运载体结合)是实施基因工程的第二步,也是基因工程的核心.其构建目的是使目的基因能在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时,使目的基因能够表达和发挥作用. 基因工程又称基因拼接技术和DNA重组技术,是以分子遗传学为理论基础,以分子生物学和微生物学的现代方法为手段,将不同来源的基因按预先设计的蓝图,在体外构建杂种DNA分子,然后导入活细胞,以改变生物原有的遗传特性.获得新品种.生产新产品.基因工程技

基因表达载体的组成有启动子.终止子.标记基因.目的基因,是以分子遗传学为理论基础,以分子生物学和微生物学的现代方法为手段,将不同来源的基因按预先设计的蓝图,在体外构建杂种DNA分子,然后导入活细胞,以改变生物原有的遗传特性.获得新品种.生产新产品.基因工程技术为基因的结构和功能的研究提供了有力的手段. 基因表达载体的构建(即目的基因与运载体结合)是实施基因工程的第二步,也是基因工程的核心.其构建目的是使目的基因能在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时,使目的基因能够表达和发挥作用.

启动子.RNA酶的结合部位终止子.一段有特殊结构的DNA短片段.转录结束的标志目的基因.标记基因.共重组DNA的鉴定和选择复制原点.DNA复制起点E(DNA聚合酶结合位点). 基因表达载体的构建(即目的基因与运载体结合)是实施基因工程的第二步,也是基因工程的核心.其构建目的是使目的基因能在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时,使目的基因能够表达和发挥作用.

操作步骤如下: 1.用一定的限制酶切割质粒,使质粒出现缺口,露出黏性末端: 2.再用同一种限制酶切断目的基因,使其产生相同的黏性末端: 3.将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处: 4.再使碱基互补配对结合,两个黏性末端吻合在一起,碱基之间形成氢键: 5.再加入适量的DNA连接酶,催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键,从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来,形成一个重组DNA分子.

包括以下几部分: 启动子:RNA酶的结合部位. 终止子:一段有特殊结构的DNA短片段,转录结束的标志. 目的基因:这个一定得有. 标记基因:共重组DNA的鉴定和选择. 复制原点:DNA复制起点,即DNA聚合酶结合位点. 基因是产生一条多肽链或功能RNA所需的全部核苷酸序列.基因支持着生命的基本构造和性能.储存着生命的种族.血型.孕育.生长.凋亡等过程的全部信息.环境和遗传的互相依赖,演绎着生命的繁衍.细胞分裂和蛋白质合成等重要生理过程.

标记基因可以是特有的抗性基因,成功导入并表达该标记基因的生物就具有相应的抗性,据此判断基因表达载体是否成功导入细胞内,此外,标记基因也可以是用放射性同位素标记的基因,通过检测放射性来判断基因表达载体是否成功导入受体细胞. 在基因表达载体中,由于构建载体的目的不同,需要的标记基因也不同.有的标记基因是质粒固有的,有的标记基因是另外加上的.一般情况下,质粒载体在基因组中有1~2个筛选标记,为寄主提供于检测的表型特征.

启动子是基因工程中基因表达载体上能够使目的基因开始进行转录翻译的一段DNA序列,属于基因的非编码区,负责调控基因的转录. 起始密码子是蛋白质翻译过程中被核糖体识别并与起始转运RNA结合而作为肽链起始合成的信使核糖核酸三联体碱基序列,决定翻译的起始.