目的基因的检测与鉴定

检测是否成功导入目的基因的方法是在目的基因片段中偶联一个抗生素的抗性基因片段源,将他们作为一个整体导入受体,用抗生素在受体上做一个杀伤曲线度,根据这个曲线选择合适的抗生素浓度,在培养受体时加压筛选,能够留下来的受体都是已经成功导入目的基因. 目的基因也称靶标基因,是指在实验中研究或操纵的特定基因.在基因克隆过程中目的基因就是要分离.纯化.克隆并转化到生物体的那个可以带来预期表型性状如抗虫或耐除草剂的基因.

1.目的基因表达的基本定义:目的基因的表达,是基因工程中常说的一个词,原意是导入目的基因后,该基因能在细胞内合成相应的蛋白质: 2.目的基因是否表达的检测方法:检测时检测到目标蛋白质,说明目的基因表达成功,判断目的基因是否表达,除了检测蛋白质外,还可以检测利用DNA分子杂交技术与mRNA杂交,如果杂交成功,说明目的基因表达成功,也可根据在细胞或生物体中所观察到的生物化学或表型的变化来决定目的基因是否表达.

1.从基因文库中获取目的基因:2.cDNA文库:3.反转录法:4.人工合成法.目的基因,也称靶标基因,是指在实验中研究或操纵的特定基因.在基因克隆过程中目的基因就是要分离.纯化.克隆并转化到生物体的那个可以带来预期表型性状如抗虫或耐除草剂的基因. 目的基因获得方法是取得含有所需生物学功能或编码所需产物结构基因的DNA片段的方法.1969年贝克威思等从大肠杆菌中分离出了乳糖操纵子DNA,以后有不少科学家用生物学方法.物理化学方法分离出许多纯化的基因.但总的来看为数不多. 1970年首次完成了77对

获取目的基因的两大途径是:人工合成和从细胞中分离,人工合成法包括反转录法(先获得信使RNA,通过逆转录合成DNA)和化学合成法(先分析出蛋白质的氨基酸顺序,再依次推算出信使RNA.DNA的碱基顺序,用脱氧核苷酸人工合成). 目的基因,就是指已被或欲被分离.改造.扩增和表达的特定基因或DNA片段,一般能编码某一产物或控制某一性状.

把需要研究的基因称为目的基因.一般把需要分析的基因称靶基因,在基因克隆过程中有时两者均称为插入基因,有时三者含义相近.所以有时有些书本上也笼统的称之为:"用限制性核酸内切酶切割目的基因". 基因(遗传因子)是具有遗传效应的DNA片段(部分病毒如烟草花叶病毒.HIV的遗传物质是RNA).基因支持着生命的基本构造和性能.储存着生命的种族.血型.孕育.生长.凋亡等过程的全部信息.

1.当目的基因的序列已知时:用化学方法合成目的基因,或用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因. 将含有某种生物的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存.各个受体菌分别含有这种生物不同的基因,称为基因文库.当需要某一片段时,根据目的基因的有关信息来获取目的基因.如根据基因的核苷酸序列.基因的功能.基因在染色体上的位置.基因的转录产物mRNA,以及基因的表达产物蛋白质等特性来获取目的基因. 2.当目的基因序列未知时:建立一个包括目的基因在内的基因文库,从基因文库中提取目的基因. 3.用PCR技术扩增

将目的基因导入植物细胞的方法包括:农杆菌转化法.基因枪法.花粉管通道法.其中,农杆菌转化法是用的最多的方法,主要是针对双子叶植物和裸子植物. 基因工程的原料就是目的基因.所谓目的基因,就是指已被或欲被分离.改造.扩增和表达的特定基因或DNA片段,一般能编码某一产物或控制某一性状.

人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法.反转录法是以目的基因转录成的信使RNA为模板,反转录成互补的单链DNA,然后在酶的作用下合成双链DNA,从而获得所需要的基因:化学合成法是根据已知的蛋白质的氨基酸序列,推测出相应的信使RNA序列,然后按照碱基互补配对原则,推测出它的结构基因的核苷酸序列,再通过化学的方法,以单核苷酸为原料合成目的基因.如人的血红蛋白基因.胰岛素基因等就可以通过人工合成基因的方法获得.

体外克隆目的基因方法有很多,目前用于获得目的基因的方法有几种,如:限制性内切酶.直接分离法.文库筛选法.体外扩增法和人工合成法等,其中限制性内切酶法直接分离目的基因和多聚酶链式反应(PCR),或逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)体外扩增目的DNA片段是目前最常用的方法.将基因组DNA用限制性内切酶消化后插入到适当载体中,得到含有不同插入片段的克隆载体,这种克隆载体的混合物含有长短不同的基因组片段,这就是基因文库.